瓊脂糖凝膠 CL-2B是在瓊脂糖凝膠 2B的基礎(chǔ)上通過(guò)交聯(lián)使微球的剛性增強(qiáng)，理化性能提高，有利用于工業(yè)生產(chǎn)。該介質(zhì)用于生物大分子的凝膠層析。

1外觀

本品為白色球狀凝膠，無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。

2理化指標(biāo)

*檢測(cè)條件：層析柱 10mm×300mm *柱床高 5cm，25℃，流動(dòng)相為水。

3包裝

產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、應(yīng)用范圍"等內(nèi)容。

4貯存

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過(guò)的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

5注意事項(xiàng)

本品應(yīng)避免與氧化劑接觸，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中

6運(yùn)輸

運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

8應(yīng)用

本產(chǎn)品具有很高的化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、較好的機(jī)械性能、可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，非特異性吸附低，回收率高，可用有機(jī)溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的凝膠色譜純化。

下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過(guò)程。

8.1裝柱

凝膠過(guò)濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過(guò)柱子上加一個(gè)裝柱器來(lái)使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。

以下過(guò)程為通用介質(zhì)裝填過(guò)程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊，接好管路。

（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

（2）選擇一根一定直徑的柱子，長(zhǎng)約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（5）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用緩沖液平衡柱子，到柱床穩(wěn)定。

（6）最好用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。

8.2平衡

讓緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

8.3上樣

（1）樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。含鹽量過(guò)大、濃度過(guò)小的樣品要先做處理，再上樣。

（2）介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來(lái)。

（3）上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。

8.4洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

8.5再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。

8.6注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

8.7在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

8.8注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

8.9去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)。或用以下方法步驟去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

8.10消毒

用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

特別注意：

上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。

備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí)。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

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標(biāo)題:Comparative evaluation of methods for isolating small extracellular vesicles derived from pancreatic cancer cells

成員:Wang Jie-Min, Li Yong-Jiang, Wu Jun-Yong, Cai Jia-Xin, Wen Jing, Xiang Da-Xiong, Hu Xiong-Bin, Li Wen-Qun

論文因子:7.133 發(fā)表期刊:Cell and Bioscience pmid:33568197

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標(biāo)題:Nitric oxide-releasing micelles with intelligent targeting for enhanced anti-tumor effect of cisplatin in hypoxia

成員:Chen Yan, Fang Lei, Zhou Weixin, Chang Jinghan, Zhang Xiaojuan, He Chuanchuan, Chen Chen, Yan Ruicong, Yan Yakai, Lu Yao, Xu Chuanrui, Xiang Guangya

論文因子:10.435 發(fā)表期刊:JOURNAL OF NANOBIOTECHNOLOGY pmid:34399762

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標(biāo)題:Endothelium-Derived Engineered Extracellular Vesicles Protect the Pulmonary Endothelial Barrier in Acute Lung Injury

成員:Zhengyan Gu, Mingxue Sun, Jihao Liu, Qi Huang, Yunqin Wang, Jun Liao, Tingbin Shu, Min Tao, Guanchao Mao, Zhipeng Pei, Wenqi Meng, Xinkang Zhang, Youheng Wei, Shanshan Zhang, Songling Li, Kai Xiao, Ying Lu, Qingqiang Xu

論文因子:15.1 發(fā)表期刊:Advanced Science pmid:38062916

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標(biāo)題:Dietary Lactobacillus rhamnosus GG extracellular vesicles enhance anti-PD-1 immunotherapy efficacy against colorectal cancer

成員:Shun Lu, Jing Xu, Zihao Zhao, Yuheng Guo, Hanwen Zhang, Peter W. Jurutka, Dechun Huang, Chongjiang Cao, Shujie Cheng

論文因子:6.1 發(fā)表期刊:Food & Function pmid:37916395

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

交聯(lián)瓊脂糖凝膠CL-2B

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