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線粒體提取試劑盒從細(xì)胞裂解到高純度分離的全流程操作密碼
2025-11-13
線粒體提取試劑盒從細(xì)胞裂解到高純度分離的全流程操作密碼一、試劑盒使用前準(zhǔn)備試劑與耗材檢查確認(rèn)試劑盒組分完整(如裂解液、緩沖液、蛋白酶抑制劑、離心管、移液器吸頭等),檢查試劑有效期及儲(chǔ)存條件(如4℃冷藏或-20℃冷凍)。準(zhǔn)備輔助設(shè)備:低溫高速離心機(jī)(需預(yù)冷至4℃)、冰浴、恒溫金屬浴、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、微量移液器(量程覆蓋0.5-1000μL)、無菌操作臺(tái)。預(yù)配溶液:按說明書稀釋裂解液,加入蛋白酶抑制劑(如PMSF至終濃度1mM),避免蛋白降解。細(xì)胞樣本處理細(xì)胞類型適配:哺乳動(dòng)物細(xì)胞需...
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光影智控·膠蹤無隙——照膠儀全流程操作指南與安全要訣
2025-11-12
光影智控·膠蹤無隙——照膠儀全流程操作指南與安全要訣一、核心操作流程與規(guī)范設(shè)備準(zhǔn)備與校準(zhǔn)環(huán)境檢查:確保照膠儀放置在通風(fēng)、干燥、無塵、無振動(dòng)的臺(tái)面,溫度15-30℃,濕度≤80%。檢查電源線、數(shù)據(jù)線是否完好,儀器各部件齊全無損壞。參數(shù)預(yù)設(shè):根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇光源類型(如紫外/藍(lán)光/白光),設(shè)置照射時(shí)間、距離、焦距及曝光強(qiáng)度。校準(zhǔn)驗(yàn)證:使用標(biāo)準(zhǔn)膠片或同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校準(zhǔn),確保儀器準(zhǔn)確性;定期檢查紫外燈管壽命(如使用壽命≥50000小時(shí)),避免衰減影響結(jié)果。樣品處理與放置電泳后處理:將...
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模式識(shí)別受體的特定家族信號(hào)通路
2025-11-12
模式識(shí)別受體的特定家族負(fù)責(zé)檢測(cè)各種病原體并產(chǎn)生先天免疫反應(yīng)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)NOD樣受體(IntracellularNOD-likereceptor,NLR)家族有20多個(gè)成員,在識(shí)別細(xì)胞內(nèi)配體方面起著關(guān)鍵作用。NOD1和NOD2是兩種原型NLR,它們感知從內(nèi)體隔間逃逸出來的細(xì)菌肽聚糖片段的存在,驅(qū)動(dòng)NF-κB和MAPK的激活、細(xì)胞因子的產(chǎn)生和凋亡;另一方面,一組不同的NLR通過稱為炎癥小體的多蛋白復(fù)合物的組裝誘導(dǎo)Caspase-1活化。Caspase-1的激活調(diào)節(jié)促炎細(xì)胞因子...
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C型凝集素受體(C-type lectin receptors,CLRs)-信號(hào)通路
2025-11-12
C型凝集素受體(C-typelectinreceptors,CLRs)主要在髓樣細(xì)胞中表達(dá),為一類內(nèi)含C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域(C-typelectinlikedomain,CTLD)的蛋白超家族。樹突狀細(xì)胞(DCs)表面主要存在的Ⅱ型CLRs包括:DCs特異性細(xì)胞間黏附分子3結(jié)合非整合素(DC-SIGN)、巨噬細(xì)胞可誘導(dǎo)性C型凝集素(Mincle)、DCs相關(guān)性C型凝集素-2(Dectin-2)、血DCs抗原-2(BDCA-2)、DCs免疫受體(DCIR)以及DCs免疫激活受體(...
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MHCⅠ類-信號(hào)通路簡(jiǎn)介
2025-11-12
經(jīng)典的MHCⅠ類抗原呈遞,也成為直接呈遞,一般呈遞內(nèi)源性的抗原肽。病毒感染后,在細(xì)胞質(zhì)中翻譯后的病毒蛋白或者內(nèi)源性的宿主蛋白,都遵循該途徑。這些蛋白質(zhì)(抗原)經(jīng)過蛋白酶體的降解后,其中TAP依賴的肽會(huì)被轉(zhuǎn)位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的肽裝載復(fù)合物PLC,由TAP、鈣蛋白、ERp57和脂肪蛋白組成,負(fù)責(zé)組裝并驅(qū)動(dòng)MHCⅠ類蛋白的折疊,ERAAP/ERAP1(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氨基肽酶)介導(dǎo)修剪后的肽裝載,進(jìn)而形成PLC-MHCⅠ-肽復(fù)合物,然后MHCⅠ類分子上的高親和力肽從PLC釋放并呈遞細(xì)胞表...
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?白細(xì)胞介素1-信號(hào)通路簡(jiǎn)介
2025-11-12
白細(xì)胞介素1(IL-1)是由單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和其他類型細(xì)胞在應(yīng)答感染時(shí)產(chǎn)生的細(xì)胞因子,又稱為淋巴細(xì)胞刺激因子。有IL-1α和IL-1β兩種類型,都與免疫球蛋白超家族的同一受體結(jié)合。IL-1細(xì)胞因子家族有抗炎和促炎細(xì)胞因子,根據(jù)共受體結(jié)合可分為三個(gè)亞家族:IL-1、IL-18和IL-36。IL-1亞家族包含:IL-1α,IL-1β,IL-33,結(jié)合共受體IL-1R3;IL-18亞家族包含:IL-18和IL-37,結(jié)合共受體IL-1R5(IL-18Rα);IL-36...
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?白細(xì)胞介素2-通路簡(jiǎn)介
2025-11-12
白細(xì)胞介素2(IL-2)是免疫系統(tǒng)中的一種細(xì)胞因子,可調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的活性。IL-2的主要來源是活化的CD4+T細(xì)胞、活化的CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。IL-2通過IL-2受體發(fā)出信號(hào),IL-2受體是由三條鏈組成的復(fù)合物,α鏈(CD25),β鏈(CD122)和γ鏈(CD132),γ鏈由所有家族成員共享。IL-2與細(xì)胞表面IL-2R結(jié)合,繼而激活胞內(nèi)多種非受體型PTK,啟動(dòng)三條主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路:(1)JAK/STAT通路:在IL-2刺激后,與受體相連的或重新被...
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CCK-8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)及相關(guān)問題
2025-11-06
CellCountingKit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)?;盍τ?jì)算:.細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度...