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當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心分子生物學(xué)核酸提取相關(guān)酶R4000T4多聚核苷酸激酶(3’磷酸酶活性缺失)
T4多聚核苷酸激酶(3’磷酸酶活性缺失)

產(chǎn)品簡介

索萊寶索萊寶產(chǎn)品覆蓋:生化試劑、蛋白與免疫、多肽、抗體、ELISA、流式分析、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、小分子化合物、生化試劑盒、染色試劑、分析標(biāo)準(zhǔn)品、微生物培養(yǎng)、層析介質(zhì)、磁珠、儀器和耗材、納米材料、化學(xué)合成等 T4多聚核苷酸激酶(3’磷酸酶活性缺失)

產(chǎn)品型號(hào):R4000
更新時(shí)間:2025-08-15
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:267
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產(chǎn)品介紹

T4多聚核苷酸激酶(T4PNK)能夠催化ATP的γ-位磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到寡核苷酸鏈(雙鏈或單鏈DNA或RNA)的5’-羥基末端以及3’-單磷酸核苷上。T4多聚核苷酸激酶還具有3’磷酸酶活性,將3’-磷酸基團(tuán)從寡核苷酸的3’磷酸末端、脫氧3’-單磷酸核苷和脫氧3’-二磷酸核苷上水解掉。該酶經(jīng)修飾后,其3’磷酸酶活性缺失,但仍保留了所有激酶的活性。

應(yīng)用

1.DNA或RNA5′末端的磷酸化,以便進(jìn)行連接反應(yīng)。

2.DNA或RNA的末端標(biāo)記,用作探針和進(jìn)行DNA

測序

3.將3′端已經(jīng)磷酸化的單核苷酸5′磷酸化,制備

pNp底物,用于添加到DNA或RNA的3′端

4.對3′端有磷酸基團(tuán)的寡核苷酸的5′端進(jìn)行標(biāo)記

注意事項(xiàng)

(1)1×T4多聚核苷酸激酶反應(yīng)緩沖液:70mMTris-HClpH

7.6,10mMMgCl2,5mMDTT,37°C溫育。

(2)熱失活:65°C加熱20分鐘。

(3)在放射性標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,可用1×T4多聚核苷酸激酶反應(yīng)緩沖液、50pmol的γ-[32P]ATP和20單位的酶37℃溫育30分鐘。

(4)T4多聚核苷酸激酶需要ATP才能發(fā)揮活性,但是為了適用于高活力的放射性標(biāo)記反應(yīng),在隨酶提供的反應(yīng)緩沖液中不含ATP。因此在磷酸化修飾核酸時(shí)請單獨(dú)添加終濃度0.5~1mMATP。

(5)要提高平齊末端或5’凹陷末端的磷酸化效率,可在加入T4多聚核苷酸激酶前,先將DNA溶液于70°C加熱5分鐘,然后冰上冷卻,并加入5%(W/V)的PEG-8000。

(6)一般來說,進(jìn)行激酶反應(yīng)之后是連接反應(yīng)。在這種情況下,T4多聚核苷酸激酶反應(yīng)在連接酶反應(yīng)緩沖液中37°C溫育30分鐘即可。反應(yīng)后的產(chǎn)物可直接進(jìn)行連接,無需改變緩沖液和進(jìn)行熱失活。如果連接時(shí)需要保持其它DNA片段的去磷酸化狀態(tài),則需要在連接反應(yīng)前熱失活T4多聚核苷酸激酶。



T4多聚核苷酸激酶(3’磷酸酶活性缺失)

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