本品用于分離鵝脾臟淋巴細(xì)胞。

本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

規(guī)格：4 ×200mL/kit
保存：室溫避光儲存，有效期至少2年。啟封后置4℃保存，有效期一周。
試劑盒內(nèi)容：
樣本稀釋液             200mL
細(xì)胞清洗液            200mL
淋巴細(xì)胞分離液          200mL
試劑F              200mL
說明書            1 份
一、 脾臟組織單細(xì)胞懸液的制備方法
注：A．全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。
    B．本試劑盒中不包含膠原酶，若采用酶消化法制備單細(xì)胞懸液，請用戶根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室要求另購不同類型膠原酶。
1. 剪碎法：將組織塊放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪將組織剪至勻漿狀，加入5mL F液及20%胎牛血清；用吸管吸取組織勻漿，用100目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾到試管內(nèi)；離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3 min，再用細(xì)胞清洗液清洗3次，每次以500rpm短時低速離心除去細(xì)胞碎片，以200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過濾去細(xì)胞團(tuán)塊。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為（2～5）×107個/mL。常溫下放置, 待測細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或樣本稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×108~1×109個/mL的單細(xì)胞懸液備用。
2. 勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊；放入70mL組織研磨器內(nèi)，加入2mLF液及20%胎牛血清；緩慢轉(zhuǎn)動研棒，研磨至勻漿；用5mLF液及20%胎牛血清沖洗研器；收集細(xì)胞懸液，經(jīng)200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過濾；離心沉淀800rpm×2min ，再用細(xì)胞清洗液洗3次，離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為（2～5）×107個/mL。常溫下放置, 待測細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或樣本稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×108~1×109個/mL的單細(xì)胞懸液備用。
3. 酶消化法：     
A．用F液將膠原酶稀釋，終濃度為400 U/mL，至于冰浴備用。 
B．取一適當(dāng)大小培養(yǎng)皿進(jìn)行操作：用鑷子夾碎動物脾臟，加入稀釋后的膠原酶，37℃消化20分鐘。 
C．以100或200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過濾，離心沉淀800prm×2min ，再用細(xì)胞清洗液洗3次，離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為（2～5）×107個/mL。常溫下放置, 待測細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或樣本稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×108~1×109個/mL的單細(xì)胞懸液備用。
細(xì)胞計(jì)數(shù)方法:     
細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用來計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法。一般利用計(jì)數(shù)板（血球計(jì)數(shù)板）進(jìn)行。既可用于分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)接種前計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，也可用于對培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。不論計(jì)數(shù)的對象如何，均須制備分散的細(xì)胞懸液。 
計(jì)數(shù)與計(jì)算過程 
1）在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)專用的蓋玻片。 
2）用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液，至蓋玻片被液體充滿為止。 
3）置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者，對于細(xì)胞團(tuán)按單個細(xì)胞計(jì)數(shù)。 
4）按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度： 細(xì)胞密度＝（4個大格細(xì)胞總數(shù)/4）×104個/mL×稀釋倍數(shù)
公式中乘以104 因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個大格的體積為：
 1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3而 1mL＝1000mm3
細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn)：  
A．進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時，要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于104個/mL，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中；顯微鏡下計(jì)數(shù)時，遇到2個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞團(tuán)>10％，說明細(xì)胞分散不充分; 或細(xì)胞數(shù)

鵝脾臟淋巴細(xì)胞分離液試劑盒

鵝脾臟淋巴細(xì)胞分離液試劑盒