Z0020  引物合成2-OD  索萊寶自產(chǎn) 

引物合成是通過測(cè)定引物的OD值，溶解引物，終合成引物的一個(gè)完善的過程。

目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA的片段，具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連接。

引物合成特點(diǎn)

1.引物合成的純度高。

2.合成的序列長。

3.合成的效果好。

引物純化方式

1.C18柱脫鹽：有人稱其為簡易反相柱，它對(duì)DNA有特異性的吸附，可以被有機(jī)溶解洗脫，但不會(huì)被水洗脫，所以能有效地去除鹽分。它不能有效去除比目的片段短的小片段。這種方法一般不會(huì)對(duì)普通PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。對(duì)于需要用于測(cè)序、克隆的引物不能使用這個(gè)。

2.OPC純化： OPC純化是根據(jù)DNA保護(hù)基（DMTr基）和Cartridge柱中樹脂間的親合力作用的原理進(jìn)行純化目的DNA的片段。

3.PAGE純：PAGE純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，對(duì)DNA的片段進(jìn)行分離，然后從凝膠中回收目的DNA的方法。PAGE純化法也是一種非常有效的DNA純化方法，純化后的DNA純度大于95%，對(duì)長鏈Oligo DNA (大于50mer)的純化特別有效。

4.HPLC純化：HPLC純化是使用高效液相色譜的原理，對(duì)DNA的片段進(jìn)行純化。純度可以大于99%。主要用于短鏈和修飾引物的純化。

5引物的OD數(shù)的定量

用紫外分光光度計(jì)，波長260nm，石英比色杯，光程為1厘米，測(cè)定溶液的光密度。測(cè)定時(shí)溶液的光密度好稀釋到0.2-1.0之間。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后，用1ml水稀釋測(cè)OD值。需要根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出母液的OD值。