瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì) rProtein A

核酸電泳是進(jìn)行核酸研究的重要手段，是核酸探針、核酸擴(kuò)增和序列分析等技術(shù)所*的組成部分。核酸電泳通常在瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行，濃度不同的瓊脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子篩網(wǎng)孔大小不同的凝膠，可用于分離不同分子量的核酸片段。以下中間介紹的是瓊脂糖核酸電泳操作步驟。

瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì) rProtein A

    瓊脂糖核酸電泳操作步驟 

    1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；

    2.根據(jù)欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶?jī)?nèi)，定量加入電泳緩沖液（一般20~30?ml）；

    3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；

    4.室溫下30~45分鐘后凝膠*凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內(nèi)；

    5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面1mm為宜，如樣品孔內(nèi)有氣泡，應(yīng)設(shè)法除去；

    6.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液（loading?buffer），混勻后，用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi)；

    7.接通電源，紅色為正極，黑色為負(fù)極，切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動(dòng)(靠近加樣孔的一端為負(fù))。一般60～100V電壓，電泳20～40min即可；

    8.根據(jù)指示劑泳動(dòng)的位置，判斷是否終止電泳；

    9.電泳完畢，關(guān)上電源，在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置，并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker比較被擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。

    瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,瓊脂糖核酸電泳操作步驟中要注意的是，不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長(zhǎng)度從200bp近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強(qiáng)度和方向恒定的電場(chǎng)下電泳。