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Solarbio 大鼠骨髓單個核細胞分離液試劑盒

單個核細胞分離方法 1. 制備骨髓的單細胞懸液。 2. 取一支適當?shù)碾x心管，加入與骨髓單細胞懸液等量的分離液（分離液少不得少于3 mL，總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果）。 3. 小心吸取單細胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取單細胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。） 4. 室溫，500~900g，離心20~30min。（根據骨髓單細胞懸液的量確定離心條件，單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件可以自行摸索，以達到分離效果）。 5. 離心后，此時離心管中由上下細胞分四層。層為稀釋液層；第二層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層；第三層為透明分離液層；第四層為紅細胞層。 6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層另一潔凈的15mL 離心管中，向離心管中加入10ml細胞洗滌液洗滌白膜層細胞，250g，離心10min。 7. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。 8. 重復步驟7 9. 棄上清，細胞重懸備用。 骨髓單細胞懸液的制備方法小動物骨髓的采集： 1. 處死動物，無菌提取股骨和脛骨，剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔（注意盡可能少的剪走骨髓腔）。 2. 取1ml的無菌注射器，吸取少量的含有10%標準胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養(yǎng)基，沖洗骨髓腔以獲得骨髓。 3. 終制備成2×10 8–1×10 9 /ml 的單細胞懸液備用。大動物骨髓的采集：分層示意圖大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法：先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計好皮膚到骨髓的距離，把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊，右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入，輕輕左右旋轉將穿刺針鉆入，當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。連接注射器緩慢抽吸骨髓組織，當注射器內抽到少許骨髓時即停止抽吸。用含10%標準胎牛血清的稀釋液調整細胞濃度為2×10 8–1×10 9/ml 的單細胞懸液備用。常用的骨髓穿刺點：股骨：穿刺部位在股骨內側面,靠下端的凹面處；胸骨：穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處；肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各點的中點；脛骨：穿刺部位是股骨內側、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺結束后要用膠布封貼穿刺孔，防止發(fā)生氣胸。 注意事項： A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免微生物污染。 B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。 C. 待分離的組織要求新鮮，避免冷凍和冷藏。 D. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁影響分離效果。 E. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，那在制備單細胞懸液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生物污染

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