輔酶ⅡNADP(H)含量檢測(cè)試劑盒

可見分光光度法
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
 BC1100
 50T/24S
酸性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
堿性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：基質(zhì)緩沖液 15mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存，用時(shí)加入 4mL 雙蒸水，混勻；
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存，用時(shí)加入 4mL 雙蒸水，混勻；
試劑四：粉劑×1 支，4 ℃保存，用時(shí)加入 4mL 雙蒸水，混勻；
試劑五：液體 1.8mL×1 支，4 ℃保存；
試劑六：液體 30mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑七：液體 50mL×1 瓶，4 ℃保存。
一、NADP 和 NADPH 的提?。?br />1、血清（漿）中 NADP 和 NADPH 的提?。?br />NADP 的提取：取 0.1mL 血清（漿），加入 0.9 mL 酸性提取液，煮沸 5min(蓋緊)；冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min；取上清加入等體積堿性提取液使之中和；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測(cè)。

NADH 的提?。喝?0.1mL 血清（漿），加入 0.9 mL 堿性提取液，煮沸 5min,冰浴中冷卻后，10000g 4℃離心10min，取上清加入等體積酸性提取液使之中和；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測(cè)。

2、組織中 NADP 和 NADPH 的提?。?br />NADP 的提取：稱取約 0.1g 組織，加入 0.9 mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊)，冰浴冷卻后，10000g4℃離心 10min，取上清加入等體積堿性提取液混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測(cè)。
NADPH 的提?。悍Q取約 0.1g 組織，加入 0.9 mL 堿性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊)，冰浴冷卻后，10000g4℃離心 10min，取上清加入等體積酸性提取液混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測(cè)。

3、細(xì)胞或細(xì)菌中 NADP 和 NADPH 的提?。?br />NADP 的提取：收集 400-500 萬細(xì)胞或細(xì)菌，加入 0.9 mL 酸性提取液，超聲波破碎 1min（強(qiáng)度 20％或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，冰上保存待測(cè)。

NADH 的提?。菏占?400-500 萬細(xì)胞或細(xì)菌，加入 0.9 mL 堿性提取液，超聲波破碎 1min（強(qiáng)度 20％或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，混勻，冰上保存待測(cè)

相關(guān)文獻(xiàn):

《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809
 

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