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索萊寶臺盼藍染色法的原理及操作步驟

臺盼藍染液是細(xì)胞活性染料,常用于檢測細(xì)胞膜的完整性。細(xì)胞損傷或死亡時,臺盼藍可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA結(jié)合,使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測細(xì)胞是否存活。

臺盼藍染色法的原理

正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍,使之不能夠進入胞內(nèi);而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍染成藍色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺盼藍是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù),就可以對細(xì)胞存活率進行比較的定量。

臺盼藍染色法的操作步驟

材料:

1、顯微鏡、玻片、蓋玻片、滴管;

2、試劑:0.4%臺盼藍染液;

3、臺盼藍(Trypan blue):0.4g;

4、生理鹽水:100ml;

操作步驟:

1、用Hanks液配制0.1%臺盼藍溶液;

2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液來消化培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞;

3、再加入適量Hanks液制成細(xì)胞懸液;

4、將待染色細(xì)胞稀釋所需濃度(方法及濃度范圍與細(xì)胞計數(shù)相同);

5、每0.1ml細(xì)胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴,室溫下染3—5min;

6、染色過的細(xì)胞材料,取一滴細(xì)胞懸液置玻片上,加蓋玻片后放高倍鏡下觀察;

7、死亡的細(xì)胞著淺藍色并膨大,無光澤?;罴?xì)胞不著色并保持正常形態(tài),有光澤;

8、計數(shù)1000個細(xì)胞中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目;

9、統(tǒng)計未染色細(xì)胞。可按公式計算出細(xì)胞活率。

(細(xì)胞活率(%)=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100。)

臺盼藍染色法注意事項:

1、染色時間不能太長,否則活細(xì)胞也會逐漸積累染料而染成顏色,使監(jiān)測結(jié)果偏低。

2、另可結(jié)合細(xì)胞計數(shù)方法,同時進行細(xì)胞計數(shù)和活力檢測。

3、有潛在致癌危險,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

北京索萊寶科技有限公司為生化試劑供應(yīng)商,專業(yè)生產(chǎn)銷售生化試劑、生物試劑、細(xì)胞培養(yǎng)基、實驗耗材等產(chǎn)品。臺盼藍染色液為索萊寶的自產(chǎn)產(chǎn)品,其貨號為C0040。臺盼藍(Trypan Blue)或稱臺盼蘭、錐蟲藍,是細(xì)胞活性染料,常用于檢測細(xì)胞膜的完整性與細(xì)胞的存活率,是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。

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