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LB培養(yǎng)基的作用及配置

LB培養(yǎng)基是微生物學(xué)實驗中常用的培養(yǎng)基,用于培養(yǎng)大腸桿菌等細(xì)菌。其分為液態(tài)或是加入瓊脂制成的固態(tài)培養(yǎng)基。早LB培養(yǎng)基中加入抗生素還可用于大腸桿菌為宿主的克隆。LB一般被解釋為Luria-Bertani培養(yǎng)基,然而根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說法,這個名字來源於英語的lysogeny broth,即溶菌肉湯。

LB培養(yǎng)基的配置:

成分:

胰蛋白胨(tryptone)10g;

酵母提取物(yeast extract)5g;

氯化鈉(NaCl)10g;

配制方法:

(1)稱量 分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于燒杯中;

(2)溶化 加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中,用玻棒攪拌,使藥品全部溶化;

(3)調(diào)pH 用1mol/L NaOH溶液調(diào)pH7.2;

(4)定容 將溶液倒入量筒中,加水所需體積;

(5)加瓊脂 加入所需量瓊脂,加熱融化,補(bǔ)足失水;

(6)分裝、加塞、包扎;

(7)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min;

固體培養(yǎng)基另加 瓊脂粉 15-20g;

LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣,加10g~15g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。

LB固體培養(yǎng)基倒板:

1、配制:100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉

2、抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中,待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效,并充分搖勻。

3、倒板:一般15ml-20ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后,打開蓋子,在紫外下照10-15分鐘。

4、保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個月內(nèi)使用。

LB培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn):

LB培養(yǎng)基由蛋白胨、酵母膏、nacl組成。先,蛋白胨是經(jīng)過胰酶處理過的蛋白,處理后,大分子的蛋白分子量變小,細(xì)菌更容易利用。此外,還含有嘌呤,提供生長因子。如要培養(yǎng)大腸桿菌,其實用普通蛋白胨代替胰蛋白胨是沒有問題的。蛋白胨為細(xì)菌的生長提供氮源。其次培養(yǎng)基中的酵母膏酵母提取物主要成分是氨基酸、小肽、核甘酸、b族維生素、主要為細(xì)菌提供維生素和微量元素,是細(xì)菌生長所必須的.氯化鈉在培養(yǎng)基中的作用是維持滲透壓,兼能可提供無機(jī)鹽。

LB培養(yǎng)基與瓊脂培養(yǎng)基之間的兩大區(qū)別:

區(qū)別一:瓊脂培養(yǎng)基就是加了瓊脂粉凝結(jié)成固體的LB培養(yǎng)基。固體的培養(yǎng)基用于細(xì)菌涂板,抗性篩選挑選單克隆之用 液體的用于單克隆菌種擴(kuò)大培養(yǎng),提取目的基因或者蛋白之用。

區(qū)別之二:就是LB培養(yǎng)基是液體的,而營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)是固體 具體的配方問題—— LB培養(yǎng)基的配方如下:?胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化鈉(NaCl) 5g/L。另外根據(jù)經(jīng)驗值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達(dá)到7.4,然后來培養(yǎng)E-coli。 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配方: 牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g 氯化鈉 0.5g 瓊脂 2g 自來水 100mL pH 7.0~7.2。

北京索萊寶科技有限公司常備貨產(chǎn)品LB固體培養(yǎng)基(干粉)和LB液體培養(yǎng)基(干粉),貨號為L1015和L1010。LB培養(yǎng)基是分子生物學(xué)中常用的一種培養(yǎng)基,用于細(xì)菌培養(yǎng)。本公司所生產(chǎn)的LB培養(yǎng)基原料,NaCl為國產(chǎn)分析純,胰化蛋白胨及酵母粉為進(jìn)口OXOID,酵母粉為日本進(jìn)口原材料,經(jīng)充分混勻得所。

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