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【產(chǎn)品資訊】CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒說明書

CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品簡介:

Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8 試劑盒,為MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。

 

使用說明: 

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測定細(xì)胞具體數(shù)量時 (測定細(xì)胞具體數(shù)量時) 

1、先用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,然后接種細(xì)胞。 

2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度,一般要做 3-5 個細(xì)胞濃度梯度,每組 3-6 個復(fù)孔。 

3、接種后培養(yǎng)細(xì)胞貼壁,然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值,制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X 軸),OD 值為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。) 

二、細(xì)胞活性檢測 

1、在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液(100µL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在 37℃,5% CO2 的條件下)。 

2、向每孔加入 10µL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。 

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。 

4、用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。 

5、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。 

三、細(xì)胞增值-毒性檢測 

1、在 96 孔板中配置 100 µL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(在 37 ℃,5% CO2 的條件下)。 

2、向培養(yǎng)板加入 10µL 不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6、12、24 或 48 小時)。 

3、向每孔加入 10 µL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。 

4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。 

5、用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。 

6、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。 

 

 

活力計算:. 

細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[ A(0 加藥)-A(空白)]×100 

A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度 

A(空白):具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度 

A(0 加藥):具有細(xì)胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力 

注意事項: 

①建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。 

②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。 

③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時,貼壁細(xì)胞的小接種量少為 1 ,000 個/孔 (100 µL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 ( 100 µL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實驗,請先計算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK-8 溶液。 

④如果沒有 450nm 的濾光片,可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片,但是 450nm 檢測靈敏度高。 

⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。 

CCK----8 法與其它檢測?法之間的mtt法較: 詳見說明書  

 

相關(guān)產(chǎn)品: 

M1020 MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒 

P1020 1×PBS,PH7.2-7.4,0.01M,細(xì)胞培養(yǎng)級 

H1020 Hanks,含鈣鎂,含酚紅(HBSS) 

H2045 EBSS(不含鈣鎂,不含酚紅 ) 

12100 DMEM(H) 

S9000 特級胎牛血清 

P1400 青鏈霉素混合液(100×) 

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