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LB培養(yǎng)基分類及倒板是什么
 LB培養(yǎng)基分類及倒板是什么
   LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱,生化分子實(shí)驗(yàn)中一般用該培養(yǎng)基來預(yù)培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴(kuò)增,達(dá)到使用要求.
   LB培養(yǎng)基分類
  液態(tài)培養(yǎng)基
  根據(jù)《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養(yǎng)基,應(yīng)該在950 ml去離子水中加入:
  胰蛋白胨10g
  酵母提取物5g
  NaCl 10g
  搖動容器直溶質(zhì)溶解.用5mol/LNaOH調(diào)pH7.0.用去離子水定容1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.
  培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨(dú)存活和擴(kuò)增的工程菌.通過培養(yǎng)工程菌,我們可以表達(dá)大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒,工程菌的有效擴(kuò)增是生化分子實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ).
   LB培養(yǎng)基的配方如下:
  胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
  酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
  氯化鈉(NaCl) 10g/L
  另外根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達(dá)到7.4(該pH適合目前使用廣的原核表達(dá)菌種E.coli的生長)
  固態(tài)培養(yǎng)基
   LB培養(yǎng)基1L和液體一樣,加10g~15g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗
  生素,并且倒好板。
  倒板
  1.配制:100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉
  2.抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中,待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效,并充分搖勻。
  3.倒板:一般15ml-20ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后,打開蓋子,在紫外下照10-15分鐘。
  4.保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個月內(nèi)使用。
  ph值需要控制在7.4

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