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當抗體遇上Protein A/G beads

更新時間:2015-12-28點擊次數(shù):4109

當抗體遇上Protein A/G beads
http://www.chem17.com/st282643/erlist_968920.html 

近遇到一個問題:免疫沉淀后,抗體和Protein A/G beads 交聯(lián)劑是什么?

 

圖一:未結(jié)合抗體

 

圖二:抗體被共價結(jié)合到蛋白A,G上

 

為了將抗體共價耦聯(lián)到瓊脂固相化的Protein A或G上,這里DSS交聯(lián)劑就發(fā)揮作用了,它的特點有:
? 抗體非共價結(jié)合到蛋白 A/G Plus上 
? DSS交聯(lián)劑共價結(jié)合抗體和蛋白A/G Plus 
? 抗體不被洗脫下來 

為此,科普了一下交聯(lián)劑相關(guān)的信息。

 

什么是交聯(lián)劑?
交聯(lián)劑是一類小分子化合物,分子量一般在200-600之間,具有2個或者更多的針對特殊基團(氨基、巰基等)的反應性末端,可以和2個或者更多的分子分別偶聯(lián)從而使這些分子結(jié)合在一起。在生命科學研究中,巧妙地運用交聯(lián)劑可以使很多工作取得突破。


目前已經(jīng)被廣泛地應用于:細胞膜結(jié)構(gòu)研究,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究,蛋白質(zhì)間相互作用研究,生物daodan研究,載體蛋白與半抗原的連接,蛋白質(zhì)或其他分子的固相化,抗體的標記,標記轉(zhuǎn)移,蛋白質(zhì)與核酸的連接。


如何選擇交聯(lián)劑?

交聯(lián)劑的選擇基于它們的化學反應性(例如:對于特定官能團的專一性)以及其他與預期應用相關(guān)的因素,包括:

? 化學特異性

? 間隔臂長度

? 水溶性和細胞膜通透性

? 相同的或不同的反應基團(同雙功能與異雙功能比較)

? 自發(fā)反應或光反應性基團

? 間隔臂是否可被剪切

? 包含可被放射性標記或其他方式標記的部分

 

性交聯(lián)劑基團與其官能團靶點

反應基團

官能團靶點

芳基疊氮化物(Aryl Azide)

非選擇性(或伯胺)

碳化二亞胺(Carbodiimide)

胺/羧基(-NH2/-COOH)

zhong氮甲烷(Diazirine)

非選擇性

酰肼(Hydrazide)

醛(-CHO)(氧化的碳水化合物)

羥甲基膦(Hydroxymethyl Phosphine)

胺(-NH2)

亞胺酸酯(Imidoester)

胺(-NH2)

馬來酰亞胺(Maleimide)

巰基(-SH)

鹽乙酸酯(溴代或碘代)

(Haloacetate(Bromo- or Iodo-))

巰基(-SH)

N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS-ester)

胺(-NH2)

五氟代苯酯(PFP-ester)

胺(-NH2)

補骨脂素(Psoralen)

DNA和RNA

吡啶基二硫化物(Pyridyl Disulfide)

巰基(-SH)

乙烯基砜(Vinyl Sulfone)

巰基,胺,羥基 

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