干細(xì)胞是一種未充分分化，具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞，在一定誘導(dǎo)條件下，可以分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和成肌細(xì)胞等，還可以分化為巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等骨髓基質(zhì)細(xì)胞，具有發(fā)育為骨、軟骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基質(zhì)等中胚層組織的潛能。
簡(jiǎn)言之，干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化就是選擇適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)劑和誘導(dǎo)方法，通過誘導(dǎo)劑與細(xì)胞表面受體結(jié)合或使細(xì)胞發(fā)生輕度可逆性損傷等，使被誘導(dǎo)細(xì)胞按預(yù)定的細(xì)胞類型方向分化，然后將這些定向分化的細(xì)胞進(jìn)行分離和培養(yǎng)傳代，從而得到人們所需要的細(xì)胞類型。一般的，成骨分化和成脂分化是間充質(zhì)干細(xì)胞MSC必要的功能性鑒定指標(biāo)。成骨分化經(jīng)茜素紅染色法鑒定，成脂分化經(jīng)油紅O染色法鑒定。
Solarbio新增了成骨/成脂誘導(dǎo)迷你化合物Kit，每種Kit均由對(duì)應(yīng)種類經(jīng)典的可用于誘導(dǎo)的基礎(chǔ)試劑、用于鑒定與分析的高品質(zhì)染料以及相關(guān)試劑組成，具有良好的生物活性?？蛻粢部梢愿鶕?jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求刪減或添加其他的化合物，也可靈活定制專屬Kit，所有組分均已經(jīng)過NMR、HPLC或MS檢測(cè)，以確保化合物純度和準(zhǔn)確性。
產(chǎn)品說明
IK-OIN-1 | 成骨誘導(dǎo)小分子化合物Kit |
IK-LIN-1 | 成脂誘導(dǎo)小分子化合物Kit |
基本操作（僅供參考）
1. 接種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，按照2×104cells/cm2的細(xì)胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至相應(yīng)的融合度（成骨誘導(dǎo)：60~70%；成脂誘導(dǎo)：90~100%），棄掉上清，加入成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、維生素C、茜素紅等）或成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、胰島素、吲哚美辛和IBMX）。
2. 細(xì)胞分化誘導(dǎo)
成骨誘導(dǎo)：每2~3天更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基，于37℃，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)，并注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化（一般約14~28天左右）。根據(jù)細(xì)胞鈣鹽結(jié)晶析出和鈣質(zhì)結(jié)節(jié)形成的情況，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時(shí)間，進(jìn)行后續(xù)固定和染色鑒定（茜素紅染色）。
成脂誘導(dǎo)：于37℃，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約2~3天，更換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基維持液（只含有胰島素）培養(yǎng)1天。按照以上換液頻率繼續(xù)誘導(dǎo)（一般是3個(gè)循環(huán)，約14天左右），并注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化。根據(jù)細(xì)胞誘導(dǎo)形成的脂滴數(shù)量和大小，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時(shí)間，并進(jìn)行后續(xù)固定和染色鑒定（油紅O染色）。
3. 細(xì)胞固定
吸去培養(yǎng)基，使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30~60 min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。
4. 染色鑒定
加入適量的染色工作液，染色合適的時(shí)間（茜素紅：3~5min；油紅O：靜置染色30min），吸去染液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細(xì)胞干燥。
5. 誘導(dǎo)評(píng)估與分析
顯微鏡下觀察染色效果，并進(jìn)行圖像采集和誘導(dǎo)評(píng)估。誘導(dǎo)成功時(shí)，成骨誘導(dǎo)后的鈣質(zhì)結(jié)節(jié)會(huì)與茜素紅染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。成脂誘導(dǎo)后的脂滴會(huì)與油紅O染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。
對(duì)于成骨誘導(dǎo)還可以進(jìn)行半定量分析，上述顯微觀察結(jié)束后，棄上清，加入氯化十六烷基吡啶溶液，室溫下孵育15~60min溶解礦化結(jié)節(jié)（茜素紅），然后在562 nm處檢測(cè)上清的OD值。
更多產(chǎn)品
套裝貨號(hào) | 套裝名稱 | 套裝說明 |
IK-CEA-1 | 細(xì)胞激活Kit-1 | 本套裝內(nèi)含1000×PMA(81μM)、Ionomycin(1.34mM)、Brefeldin A(2mM)的DMSO溶液和Monensin(10.6mM)的EtOH溶液各一支，每支溶液100μL。 |
IK-HIF-1 | 缺氧小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向HIF/HIF Prolyl-Hydroxylase的化合物，可用于細(xì)胞氧感應(yīng)相關(guān)的研究，例如：缺氧、氧化應(yīng)激等。 |
IK-ADC-1 | 抗糖尿病小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種經(jīng)典的、具有良好生物活性的糖尿病相關(guān)化合物，可用于探索糖尿病的相關(guān)研究。 |
IK-CA-2 | 腫瘤小分子 化合物Kit-2 | 本套裝精選了數(shù)種抗腫瘤化合物和具有促腫瘤活性的化合物，可用于黑色素瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、非小細(xì)胞肺癌和乳腺癌等相關(guān)研究。 |
IK-TNF-1 | 腫瘤壞死因子TNF小分子化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向腫瘤壞死因子TNF的化合物，可用于抗腫瘤的相關(guān)研究。 |
IK-PD-1 | 帕金森小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向多巴胺受體、腺苷受體、腎上腺素受體及單胺氧化酶等，可用于帕金森的相關(guān)研究。 |
IK-AD-1 | 阿茲海默癥小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種靶向Amyloid-β等受體的化合物，可用于阿茲海默癥的相關(guān)研究。 |
IK-AB-1 | 常用抗生素小分子化合物Kit-1 | 本套裝精選了數(shù)種實(shí)驗(yàn)室常備的抗生素，可用于鑒定藥物靶標(biāo)的相關(guān)研究。 |
G1450 | 茜素紅S染色液(0.2%，pH8.3) | 茜素紅S染色液由緩沖液配制，適合組織和細(xì)胞的鈣鹽染色，pH8.3更適用于培養(yǎng)細(xì)胞的鈣鹽染色，鈣鹽處有橘黃色或橘紅色沉積，顏色強(qiáng)度取決于鈣鹽含量。 |
G1262 | 油紅O染色試劑盒(細(xì)胞專用) | 本試劑盒適用于細(xì)胞誘導(dǎo)脂滴染色，可顯示最小的脂滴，可優(yōu)先為脂類從溶劑中吸附染料。標(biāo)本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福爾馬林。脂肪陽性染色結(jié)果呈橘黃至紅色，但具體顏色因脂質(zhì)濃度而定。 |
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