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科普小課堂|脂類染色Q&A

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Q1

什么是脂類?

脂類是脂肪和類脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)的統(tǒng)稱,它是構(gòu)成人體組織的正常成分,不溶于水而易溶于酒精等脂溶劑中。脂類與蛋白質(zhì)、碳水化合物是人體的三大營養(yǎng)素,其主要功能是儲能和供能。

脂滴(Lipid Droplet)是中性脂(主要為甘油三酯和酯化膽固醇)的主要貯存場所,是脂肪細(xì)胞的主要成分。正常情況下,除脂肪細(xì)胞以外,常規(guī)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)不見或僅能看到微量脂滴。


Q2

為什么要進(jìn)行脂類染色?

1

在病理情況下,心、肝、腎等實質(zhì)器官容易發(fā)生脂肪異常堆積,胞質(zhì)出現(xiàn)脂滴或者脂滴明顯增多以及形成斑塊等現(xiàn)象。因此,通過脂類染色能將這些脂滴清晰的顯現(xiàn)出來,為病理診斷提供圖像參考。

2

研究脂肪生成過程,即干細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞的機(jī)制,對于了解糖尿病、肥胖癥、心血管疾病、肝病和癌癥等疾病的發(fā)病機(jī)制和尋找潛在治療方法至關(guān)重要。通過脂類染色可以更直觀地確認(rèn)脂質(zhì)累積和細(xì)胞分化情況。


Q3

常用的脂類染色方法有哪些?

目前常用于脂類染色的有經(jīng)典蘇丹染色、油紅O染色以及尼羅紅熒光染色。脂類染色常規(guī)適用樣本包含速凍、冰凍的動植物切片以及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞。

經(jīng)典蘇丹染料包括蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ和蘇丹黑B,是常用的經(jīng)典脂質(zhì)染料,可顯示動物組織的脂質(zhì)積累和植物組織的木栓化,也可用于掩蓋組織脂褐素的自發(fā)熒光。

油紅O屬于新一代蘇丹脂質(zhì)染料,其著色較經(jīng)典染色法更深,特異性也更好。在觀察動脈粥樣硬化斑塊以及肝臟和肌肉脂質(zhì)積累方面具有很好的效用。G1263型改良油紅O染色試劑盒(環(huán)保型)在經(jīng)典異丙醇法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化更新,解決了染色液易揮發(fā)、染料易沉淀的關(guān)鍵難題,極大的降低了染色難度。

尼羅紅能與脂類物質(zhì)結(jié)合并發(fā)出熒光,在530 nm波長激發(fā)下,顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光。染色過程中基本不含有機(jī)試劑,對微小脂滴的定位和顯示效果較好??捎糜诮M織切片和培養(yǎng)細(xì)胞的脂類染色,對脂滴進(jìn)行原位標(biāo)記,并可搭配DAPI進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。


Q4

非常規(guī)的脂類染色方法有哪些?

1

特殊石蠟切片染色法:由于脂肪易溶于有機(jī)溶劑,所以不能直接乙醇脫水包埋制成石蠟切片進(jìn)行染色。若是非要制成石蠟切片,需要將初步固定后的組織先浸泡不飽和脂肪酸置換進(jìn)脂滴,然后置于重金屬酸溶液中固定處理,重金屬酸經(jīng)不飽和脂肪酸的還原作用形成黑色的重金屬——脂質(zhì)復(fù)合物,不會被二甲苯、乙醇等有機(jī)溶劑所溶解,對很微小的脂肪滴都能清晰顯示。之后再進(jìn)行脫水、透明等程序包埋成蠟塊,切片后經(jīng)脫蠟、透明可直接中性樹膠封片,切片能夠長期保存。但整個過程所需試劑繁雜,整體操作時間較長,且重金屬酸屬于有毒有害物質(zhì),所以一般不建議使用本染色方法。

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2

制成碳蠟切片染色法:除了經(jīng)典的冰凍切片染色方法外,還可以將組織制成碳蠟切片。碳蠟切片不同于石蠟切片,在組織固定水洗后,不需使用乙醇、二甲苯脫水透明可直接浸蠟包埋,且切片方法與常規(guī)石蠟切片相同,在一定程度上可以減少脂質(zhì)的流失,缺點(diǎn)就是碳蠟吸濕性強(qiáng),需避光干燥保存。


Q5

樣本如何固定以及染色后如何封片?

固定:樣本可不固定直接切片染色,如需固定則不能使用高濃度小分子醇、酮類的固定液固定,如丙酮和甲醇、乙醇會將脂滴從切片上洗脫從而不利于脂質(zhì)染色,建議使用甲醛類水性固定液,甲醛固定對組織形態(tài)保存效果更佳。

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

G2161

中性福爾馬林

固定液(10%)

500mL/5L

G2147

中性福爾馬林鈣

固定液

500mL

P1110

4%組織細(xì)胞

固定液

100mL/500mL/

10*500mL

封片:對于組織切片和細(xì)胞爬片,可以使用S2150甘油明膠、抗熒光衰減封片劑等水性封片劑封片,封片后及時拍照留存;對于培養(yǎng)板細(xì)胞,建議染色、清洗后不要晾干,使用1×PBS或ddH2O覆蓋細(xì)胞表面,保持細(xì)胞濕潤,然后在鏡下觀察拍照,晾干會導(dǎo)致鏡下脂滴發(fā)黑影響觀察。

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

S2150

甘油明膠封片劑

10mL

S2155

水性封片劑

(PVP)

10mL/100mL

S2130

抗熒光衰減封片劑

(PVP)

25mL


Q6

如何對脂質(zhì)染色結(jié)果進(jìn)行分析?

細(xì)胞:細(xì)胞經(jīng)染色和洗滌之后,可以使用純的丙酮或異丙醇等脂溶性溶劑提取出脂質(zhì)結(jié)合染料,然后轉(zhuǎn)移至檢測板中在510-520nm測定吸光度。吸光度與樣品的脂質(zhì)含量成正比,并可間接用于評估脂肪生成。

組織:可以使用圖像分析軟件,對脂滴著色面積進(jìn)行識別計算,除以總面積從而獲得脂滴含量。

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有獎問答

脂質(zhì)染色的最佳溫度是多少?

A. 2-8℃

B.10-20℃

C. 30-40℃

D. 60-80℃

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相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

G1260

飽和油紅O染色液

100mL/500mL

G1262

油紅O染色試劑盒

(細(xì)胞專用)

4×20mL/

4×50mL

G1265

糊精水溶液(1%)

100mL

O8291

油酸

500mL




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