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如何降低ELISA試劑盒實驗誤差?
  ELISA試劑盒實驗誤差概率如何降低?在實驗操作的過程中,我們除了需要多點細(xì)心之外,還有一些需要重點注意的地方:
 
  1:檢驗技師
 
  應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
 
  2:校對
 
  使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。
 
  3:仔細(xì)閱讀說明書
 
  嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。ELISA試劑盒不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗確定成立后才能改進(jìn)。
 
  4:洗滌
 
  洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。
 
  5:反應(yīng)時間
 
  反應(yīng)時間過長,酶失活;反應(yīng)時間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
 
  6:保存期
 
  注意ELISA試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。
 
  7:試劑的實用性
 
  試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。
 
  8:掌握顯色時間
 
  顯色時間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
 
  9:加樣
 
  如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,ELISA試劑盒直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。

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