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ELISA試劑盒操作中，咱們都認(rèn)為ELISA試驗(yàn)的原理好像很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關(guān)閉。然而，即使是平淡無(wú)奇的洗刷和關(guān)閉，假如做得不太好，也有或許毀了整個(gè)試驗(yàn)。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，咱們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比。布景噪音會(huì)影響您對(duì)成果的判斷。今天小編怎么教你降低ELISA試劑盒操作的布景噪音。
一、洗刷很重要：洗刷步驟看似很無(wú)聊，其實(shí)很重要，因?yàn)榧偃缥唇Y(jié)合的資料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中，那么它會(huì)添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會(huì)阻撓非特異結(jié)合反應(yīng)。假如布景過(guò)高，而您置疑洗刷不夠時(shí)，可以測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
二、關(guān)閉更關(guān)鍵：關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占有微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也期望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。假如您的布景過(guò)高，置疑關(guān)閉不充分，那么您可以測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或適當(dāng)延伸關(guān)閉時(shí)間。
三、抗體濃度須優(yōu)化：咱們通常會(huì)follow師兄師姐留下來(lái)的操作步驟，但是假如試劑稍有不同，則或許需要優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會(huì)添加布景。為了避免這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過(guò)多的一抗或二抗。
四、檢測(cè)試劑要適量：另一點(diǎn)也很清楚明了：切勿運(yùn)用過(guò)多的檢測(cè)試劑。假如濃度過(guò)高，或者未正確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高布景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
假如您的ELISA試劑盒操作中不幸地遇到了高布景，那么也無(wú)需太憂慮，順次檢查ELISA體系中的組分，并排除或許存在的問(wèn)題。盡心優(yōu)化，相信很快就會(huì)有美麗的成果。
