分享一下CCK-8試劑盒的正確操作步驟

更新時間：2020-02-19

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　　CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和細胞增殖、細胞毒性相關(guān)的實驗都可以。

　　CCK法的操作步驟：

　　實驗一：細胞活性檢測

　　1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）。

　　2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。

　　3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

　　4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

　　5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

　　實驗二：細胞增殖-毒性檢測

　　1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）。

　　2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。

　　3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。

　　4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。

　　5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

　　6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

　　7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

　　注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

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