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分享一下CCK-8試劑盒的正確操作步驟
   CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到,和細胞增殖、細胞毒性相關(guān)的實驗都可以。
 
  CCK法的操作步驟:
 
  實驗一:細胞活性檢測
 
  1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(37℃,5% CO2)。
 
  2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。
 
  3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
 
  4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
 
  5、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,吸光度不會發(fā)生變化。
 
  實驗二:細胞增殖-毒性檢測
 
  1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(37℃,5% CO2)。
 
  2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。
 
  3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6、12、24或48小時)。
 
  4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。
 
  5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
 
  6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
 
  7、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,吸光度不會發(fā)生變化。
 
  注意:如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

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