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β–半乳糖苷酶的α–互補性原理

β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解,此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量,還能在正常的多糖代謝、細胞壁組分代謝以及衰老時細胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解,釋放自由的半乳糖。
藍白斑篩選的原理分類:生物科學(xué)藍白斑篩選是重組子篩選的一種方法: 是根據(jù)載體的遺傳特征篩選重組子,如α-互補、抗生素基因等?,F(xiàn)在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區(qū)段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調(diào)控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點(MCS),它并不破壞讀框,但可使少數(shù)幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能,這種載體適用于可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細胞。因此,宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有酶活性,但它們同時存在時,可形成具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。這樣,lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實現(xiàn)了互補,稱為α-互補。
 

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