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胰蛋白酶消化液的詳細(xì)配置說明
胰蛋白酶消化液的詳細(xì)配置說明
  胰蛋白酶消化液配置
  配置步驟
  1.D-Hanks液高壓滅菌之后,晾室溫,4℃保存?zhèn)溆谩?/div>
  2.稱取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天時(shí)研磨器應(yīng)放在冰浴中),加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右,調(diào)制成糊狀。再放入4℃預(yù)冷的適量D-Hanks液中,4℃下磁力攪拌使*溶解。
  3.用NaHCO3干粉將胰酶溶液的pH值調(diào)8.0左右(胰酶作用的適pH值),并加入0.02%EDTA以協(xié)助消化作用。
  4.濾過除菌,-20℃凍存。
  胰蛋白酶消化液配置過程中的注意事項(xiàng):
  1.BSS的pH值應(yīng)確定為7.2左右。
  2.如配制的Hanks液高壓滅菌后液體變混,則可將100 mL的CaCl2與含有其他成分的液體分別裝瓶高壓滅菌之后,再在無菌條件下配制,定容。這樣可以避免高壓滅菌后液體變混。
  3.胰酶受熱易失活,所以盡量避免盛夏配制,并且在配制過程中溫度應(yīng)始終保持在4℃左右。
  4.胰酶研磨要充分,否則在過濾時(shí)會(huì)將較大的顆粒過濾掉,不能達(dá)到真正的濃度。
  5.胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰4鏁r(shí)體積會(huì)膨脹,而多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并可能造成污染。

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