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青鏈霉素混合液的使用說明
青鏈霉素混合液的使用說明
    使用說明
    1、溶液P1在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入),混勻,置于2-8℃保存。
    2、*次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇)。
    3. 使用前請(qǐng)先檢查溶液P2、P3和P4是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
    4. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍), pH值低于7. 0會(huì)降低洗脫效率。 DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。
    5. 質(zhì)粒DNA濃度>1mg/ml時(shí)清除內(nèi)毒素效率降低。由于質(zhì)粒DNA本身的性質(zhì),清除過程可導(dǎo)致部分質(zhì)粒DNA丟失,但內(nèi)毒素卻能得到大限度清除。
    6. 所有溶液應(yīng)用無內(nèi)毒素的高純水配制,所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素,玻璃器皿可高溫烘烤,非揮發(fā)性水溶液可高壓處理。
    7. DNA濃度及純度檢測(cè):得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響吸光值,但并不表示純度低。
    青鏈霉素混合液用于預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)菌污染,特別是革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌的污染。產(chǎn)品經(jīng)過濾除菌處理,可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)。青霉素的含量為10kU/ml,鏈霉素的含量為10mg/ml。在細(xì)胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml,鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。即按照100倍稀釋使用即可

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