| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | | R2000-50 | RNA病毒基因組提取試劑盒 | 50T | 700.00 | | R2000-100 | RNA病毒基因組提取試劑盒 | 100T | 1180.00 |
RNA病毒基因組提取試劑盒
保存：室溫（15℃-25℃）干燥條件下可保存12個(gè)月，更長時(shí)間的保存可置于2℃-8℃。
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組，不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇，加入到離瓶口約0.5-1cm距離，蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進(jìn)行。
1、取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀（如無沉淀可省去此步）。
2、向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
3、吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱，放入收集管中，加入700ul 洗柱液，室溫放置2分鐘，2-8℃ 12000 rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用。
4、向病毒上清中加入500ul結(jié)合液，充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響RNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的大容積為750ul，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）
5、12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。
10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜*懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的RNase free ddH2O，室溫放置5min，12000rpm離心2min。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組RNA。
注意事項(xiàng)：
1、經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。使用無RNase的塑料制品和槍頭避
免交叉污染。
2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的RNA提取量也下降。
3、若結(jié)合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
4、如果樣品消化不*，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長離心時(shí)間。
5、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過小會(huì)影響回收效率。
6、RNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-70℃，以防RNA降解。
7、RNA檢測(cè)：得到的基因組RNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。由于病毒不含有核糖體RNA，所以常規(guī)電泳無法檢測(cè)，只有后期實(shí)驗(yàn)才可檢測(cè)到。D260值為1相當(dāng)于大約40 μg/ml單鏈RNA。
相關(guān)產(chǎn)品：
R1600 DEPC處理水
SR0060 液相RNase清除劑
SR0040 固相RNase清除劑
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P1023 酚：氯仿＝25：24（PH<5.0）
R1050 5×RNA Loading Buffer
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